ICSI技術(shù)精子優(yōu)選方法的最新研究進(jìn)展!
游海 2022-5-15 16:51 生殖醫(yī)學(xué)論壇 查看: 531 評(píng)論: 0 |原作者: 邵帥,江梅|來自: 生殖醫(yī)學(xué)論壇
摘要: 本文就精子的優(yōu)選方法如低滲腫脹試驗(yàn)、激光輔助的不動(dòng)精子選擇、偏振光顯微鏡選擇、運(yùn)動(dòng)精子細(xì)胞器形態(tài)學(xué)檢查、透明質(zhì)酸介導(dǎo)的精子選擇、磁性活化細(xì)胞分選法等方法作一綜述,探討不同精子選擇策略及其對(duì)輔助生殖 ...
本文就精子的優(yōu)選方法如低滲腫脹試驗(yàn)、激光輔助的不動(dòng)精子選擇、偏振光顯微鏡選擇、運(yùn)動(dòng)精子細(xì)胞器形態(tài)學(xué)檢查、透明質(zhì)酸介導(dǎo)的精子選擇、磁性活化細(xì)胞分選法等方法作一綜述,探討不同精子選擇策略及其對(duì)輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)果的影響以及每種方法的優(yōu)缺點(diǎn),以便為胚胎實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行ICSI提供最優(yōu)質(zhì)的精子,改善臨床結(jié)局。 本文來自《生殖醫(yī)學(xué)雜志》2022年4月刊,未經(jīng)授權(quán)禁止轉(zhuǎn)載。 全球約有10%~15%的不孕不育夫婦,這些病例中約50%與男性有關(guān),原因不明的男性不育的發(fā)生率約為15%。 *胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)是通過注射針將選擇的形態(tài)正常的單個(gè)精子注射到*母細(xì)胞內(nèi)使其受精的技術(shù)。 自然受精是精子進(jìn)入生殖道,去除精漿、穿透宮頸粘液、獲能、前進(jìn)到輸*管壺腹部,與*子結(jié)合受精并通過一系列反應(yīng)穿過*丘細(xì)胞層、透明帶和*膜等極其嚴(yán)格的選擇過程,就是為了選擇最有活力、DNA完整性好、成熟的精子與*母細(xì)胞結(jié)合,得到高質(zhì)量的胚胎。 ICSI則繞過了所有的自然選擇屏障(*丘細(xì)胞層、透明帶和*膜)。 雖然ICSI對(duì)注射的精子要求比較高,通過將精子放大200~400倍,甚至放大到6 000倍觀察并選擇形態(tài)正常的精子,但只能有效選擇形態(tài)正常的精子,而有些形態(tài)正常的精子,其DNA完整性比較差,碎片比較多。 因此,從ICSI胚胎質(zhì)量以及臨床結(jié)局角度考慮出發(fā),本文從進(jìn)行ICSI時(shí)精子的選擇方法作一綜述,以便為臨床ICSI提供有效參考。 01低滲腫脹試驗(yàn) 低滲透腫脹試驗(yàn)(HOST)最初作為精子的診斷試驗(yàn),對(duì)精子質(zhì)膜的功能完整性進(jìn)行評(píng)估。在低滲條件下,精子尾部由于水的進(jìn)入而出現(xiàn)正常的功能膜膨脹或卷曲,目前在臨床實(shí)踐中作為精子存活的可靠指標(biāo)。 HOST可用于睪丸或附睪穿刺取出的精子、睪丸切開顯微取精的精子以及少弱精子癥患者手淫法取出的精子等,通過該方法可以篩選出完全不動(dòng)但有活力的精子。 Bloch等通過HOST將精子按A到G進(jìn)行分類,發(fā)現(xiàn)經(jīng)HOST選擇的精子與未經(jīng)選擇的精子相比較,HOST分類為B類和B+類的精子質(zhì)量最高(低DNA碎片,低DNA去濃縮,端粒間距離短,染色體1區(qū)域?。?/div> Casper等通過HOST選擇不活動(dòng)但有活力的精子,與隨機(jī)選擇精子相比,受精率從26%提高到43%,*裂率從23%增加到39%。Charehjooy等[7]研究表明HOST的應(yīng)用可以使胚胎具有更高的發(fā)育潛力、著床率以及妊娠率。此外,在IVF完全受精失敗的下一個(gè)ICSI周期中使用HOST,可以獲得更好質(zhì)量的精子。 以上研究表明了HOST的有效性,并建議將其作為行ICSI之前的常規(guī)操作。盡管尚未有研究證明HOST的有害作用,但胚胎實(shí)驗(yàn)室在決定使用HOST時(shí),應(yīng)該考慮其實(shí)踐運(yùn)用、使用標(biāo)準(zhǔn),并與患者簽訂相關(guān)知情協(xié)議。 02激光輔助不動(dòng)精子選擇 激光輔助不動(dòng)精子選擇(LAISS)是在行ICSI之前高倍視野下選擇形態(tài)較好的不動(dòng)精子,在靠近精子尾巴尖端處激光射擊,存活精子在射擊后精子尾部會(huì)立即出現(xiàn)卷尾或折角現(xiàn)象,但此方法不會(huì)對(duì)精子DNA造成損害。 國內(nèi)研究顯示LAISS能有效篩選睪丸中存活的不動(dòng)精子,改善ICSI的實(shí)驗(yàn)室結(jié)局,提高其正常受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率等。LAISS可以有效鑒別極重度弱精子的存活情況,這些存活的極重度弱精子通過ICSI可以達(dá)到與正常精子ICSI相同的受精率,而且有助于提高*裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率,但激光導(dǎo)致精子尾部卷曲的機(jī)制尚不清楚,可能與激光照射后介質(zhì)流入精子尾部有關(guān)。 2017年報(bào)道了一例使用LAISS技術(shù)選擇的完全不動(dòng)但存活的冷凍復(fù)蘇精子,進(jìn)行ICSI受精后成功妊娠的病例,為數(shù)量較少的不動(dòng)精子的處理提供了新的思路。Ozkavukcu等通過LAISS提取抗己酮可可堿的靜止精子進(jìn)行ICSI,移植雙囊胚后獲得健康的三胞胎。也有其他研究顯示LAISS-ICSI與傳統(tǒng)的ICSI相比,雖然能夠提高*母細(xì)胞存活率,但囊胚形成率、質(zhì)量和利用率均下降。 就目前文獻(xiàn)所顯示的沖突結(jié)果,LAISS-ICSI似乎不是提高ICSI成功率的最佳解決方案,仍需要大量的研究來證實(shí)LAISS-ICSI的成功率。也需要更多的研究和改進(jìn)措施來闡明LAISS作為行ICSI前不動(dòng)精子常規(guī)選擇的潛力及激光對(duì)胚胎發(fā)育的潛在影響機(jī)制。 03偏振光顯微鏡選擇精子 成熟精子的細(xì)胞核具有固有的雙折射,偏振光顯微鏡就是根據(jù)精子雙折射現(xiàn)象對(duì)精子進(jìn)行選擇。精子頭的雙折射可以作為反映其細(xì)胞核正常結(jié)構(gòu)組織的指標(biāo)。雙折射也可以評(píng)估頂體反應(yīng)的狀態(tài),因?yàn)槌墒斓木釉谡麄€(gè)頭部表現(xiàn)出雙折射,而發(fā)生頂體反應(yīng)的精子僅在頂體后區(qū)存在雙折射。 Magli等發(fā)現(xiàn)位于頂體后區(qū)的雙折射與反應(yīng)性頂體以及DNA完整性密切相關(guān),是成熟精子的可靠指標(biāo)。此外,雙折射模式與精子活力和正常形態(tài)之間有一定的相關(guān)性,形態(tài)異?;蚧盍Σ畹木泳哂挟惓kp折射模式,且形態(tài)與雙折射特性的關(guān)聯(lián)性更強(qiáng)。ICSI時(shí)選擇偏振光下存在雙折射的精子,受精后原核評(píng)分為Z1和Z2的顯著多于非選擇組,而且弱精子癥患者的精子行ICSI時(shí),通過雙折射選擇精子得到的妊娠結(jié)局比HOST選擇的精子得到的妊娠結(jié)局更好。 2008年,Gianaroli等利用雙折射選擇精子進(jìn)行ICSI,與傳統(tǒng)ICSI方法相比,通過偏光顯微鏡選擇的精子可以獲得更好的胚胎發(fā)育和臨床結(jié)局。兩年后,該小組基于頂體完整性(發(fā)生頂體反應(yīng)和未發(fā)生頂體反應(yīng)的精子)及其與輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)果的關(guān)系評(píng)估了雙折射模式的作用,認(rèn)為發(fā)生頂體反應(yīng)的精子和未發(fā)生頂體反應(yīng)的精子的受精率和胚胎發(fā)育均沒有顯著差異,但注射發(fā)生頂體反應(yīng)的精子可以獲得更高的著床率和臨床妊娠率。 盡管取得了這些成果,但還需要進(jìn)一步的研究來驗(yàn)證該方法。另外,對(duì)精子頭部雙折射模式的評(píng)估是基于形態(tài)學(xué)檢查,需要熟練的胚胎學(xué)家正確地執(zhí)行這項(xiàng)技術(shù)。 04運(yùn)動(dòng)精子細(xì)胞器形態(tài)學(xué)檢查 運(yùn)動(dòng)精子細(xì)胞器形態(tài)學(xué)檢查(MSOME)是一種通過超高倍顯微鏡將精子放大6 000倍后,對(duì)精子超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行評(píng)估的技術(shù)。精子超微結(jié)構(gòu)包括精子頂體、頂體后板層、細(xì)胞核、頸部、尾部和線粒體,其中精子的細(xì)胞核是影響ICSI結(jié)果的主要超微結(jié)構(gòu)。由此在MSOME基礎(chǔ)上出現(xiàn)ICSI的改良版,即形態(tài)選擇精子胞漿內(nèi)單精子注射(IMSI)。IMSI已被證明是一種有效的技術(shù),用于某些特定的患者群體的精子選擇。 有研究比較了少弱精子癥和畸形精子癥的患者分別采取ICSI和IMSI技術(shù)的妊娠結(jié)局:與ICSI組相比,IMSI組患者的妊娠率和活產(chǎn)率有上升趨勢(shì),生化妊娠率和著床率也較高。 史艷彬等研究顯示,與ICSI相比,IMSI能夠提高優(yōu)胚率,降低胚胎非整倍體率。與ICSI相比,IMSI所選精子的DNA碎片更少且凋亡轉(zhuǎn)錄基因水平更低,IMSI組的胚胎動(dòng)力學(xué)和著床率、臨床妊娠率和活產(chǎn)率等臨床結(jié)局均要優(yōu)于ICSI組。 其他研究也顯示與ICSI相比,IMSI在不影響胚胎染色體狀態(tài)的前提下,顯著提高了胚胎質(zhì)量和著床率,降低了流產(chǎn)率;由于IMSI在對(duì)精子的選擇過程中更準(zhǔn)確,所以正常染色體的囊胚形成率高于ICSI。毫無疑問,IMSI技術(shù)的使用可以幫助一些不育夫婦生育孩子,但對(duì)于方法的效率以及如何執(zhí)行IMSI的具體指南尚未達(dá)成共識(shí)。 目前,不建議在ART項(xiàng)目中常規(guī)使用IMSI,IMSI僅適用于多次植入失敗的夫婦、嚴(yán)重男性因素致不孕的患者、高齡男性和高齡產(chǎn)婦等人群。而且IMSI的臨床實(shí)踐沒有足夠的證據(jù)支持,需要進(jìn)一步的試驗(yàn)來闡明其有效性和安全性。 |